01背景
武汉龙山先生:
某专家提到“现在流传的燕窝的保健功能功效,都只是一些动物实验结果。但是动物实验跟人正常饮食相差很大,比如在果蝇、小鼠身上使用的唾液酸剂量都是非常大的,而我们普通人只是偶尔吃吃,量非常少,几乎无法获得什么健康益处。”
博士:
让我介绍同行的研究工作。简叶叶等人利用二氧化硫(SO2)熏蒸法构建肺阴虚小鼠模型,采用不同剂量的燕窝匀浆物,对肺阴虚小鼠进行干预,对其进行体征和肺部病理观察,通过检测小鼠免疫器官指数、血清中的细胞因子的含量,以研究燕窝对阴虚小鼠免疫功能的调节影响。
我们一起来关注燕窝功效与剂量。
02肺阴虚
肺阴虚证,又称肺阴亏损,是指肺脏的阴津亏损和阴虚火旺所表现的证候。
简叶叶等认为,肺阴虚为肺阴不足,虚热内生,五心烦热,甚则午后潮热,咳嗽无痰或痰少而黏等证候是其临床表现。现代医学认为阴虚个体多表现为免疫功能低下,有多种肺损伤疾病如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、支气管炎等,其基础病理为肺阴虚。
03研究介绍
1、受试动物:ICR小鼠60只,雌雄各半,20克。
2、燕窝匀浆物制备
称取9克干燕窝——加纯净水泡发5h——滤去水分——加水炖煮20min——分装、封口——高压灭菌——冷却——匀浆备用。
3、燕窝剂量
高剂量组:燕窝匀浆物作为试验燕窝高剂量组灌胃,每只小鼠0.5mL(1.2g/kg.bw,相当于人每天食用9g)。
低剂量组:将高剂量燕窝匀浆物用超纯水稀释1倍,得起低剂量组燕窝,每只小鼠0.5mL(0.6g/kg.bw,相当于人每天食用4.5g)。
中剂量组:将高、低剂量组燕窝匀浆物等量混匀,即得中剂量组燕窝匀浆物,每只小鼠0.5mL(0.9g/kg.bw,相当于人每天食用6.75g)。
《浙江省中药炮制规范》501~502页
4、实验方法
参照文献[1]进行修改,构建肺阴虚动物模型。将ICR小鼠(60只雌雄各半)随机分成即正常对照组,燕窝匀浆物(高、中、低剂量组)、模型对照组、阳性对照组共6组,每组老鼠10只。给模型对照组、燕窝匀浆组干预组、阳性对照组小鼠每天灌服甲状腺素,甲状腺素片配成15mg/mL,按0.1mL/10g体重/日的剂量给药,每日一次,用药7d;后采用SO2熏蒸法,于玻璃熏箱(SO2浓度为0.5g/m3)熏15min,1次/d,连熏8d。实验小鼠出现倦伏、呛咳、食少、烦躁易怒、体重显著减少等症状,提示造模成功[1,2]。正常对照组小鼠不用SO2熏蒸,常规饲养。燕窝匀浆物设置高、中、低剂量组,每天灌胃对应浓度燕窝匀浆物共灌胃0.5mL,阳性对照组用百合固精汤0.4mL/10g.bw[1],正常对照组、模型对照组每天均对应灌服0.5mL生理盐水,各组小鼠均从造模开始灌胃,每天一次,共灌胃15天。造模结束后,对小鼠进行眼球取血,处死,立即用冰浴上分离并取出小鼠胸腺、脾及肺组织。
5、结果
模型对照组小鼠于实验第15天出现明显的呛咳、倦伏、食少、皮毛光泽差,毛发凌乱脱落、易怒等症状,燕窝低剂量组织小鼠出现轻微上述症状,燕窝中、高剂量中小鼠精神状况较好,毛发有光泽,食欲正常,与正常组接近,说明肺阴虚小鼠模型建立成功,提示燕窝中、高剂量对提高肺阴虚小鼠的机体免疫功能有一定的作用。
正常对照组小鼠肺部组织形态间隙及支气管形态正常,有微量血细胞和一些空泡出现;燕窝低剂量组与模型对照组小鼠的肺部组织有明显的支气管肺炎症状,肺泡形成形状不规则或有明显肿大。终末细支气管周围有大量淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,支气管腔内有脱落的单层柱状上皮,支气管周围扩张,并严重充血。
燕窝中剂量和阳性对照组小鼠的肺部组织基本无炎症,形态与正常对照组接近,支气管组织形态较正常,带有少量的血细胞和空泡;燕窝高剂量组小鼠肺部组织炎症情况介于模型对照组与正常对照组小鼠之间支气管,支气管比周围有扩张趋势,但有零散的血细胞,但支气管心态较完整。推测燕窝中、高剂量组对肺阴虚小鼠有的恢复有一定的作用,并燕窝中剂量组的效果较好。
与正常对照组小鼠相比,模型对照组与燕窝低剂量组的胸腺指数脾脏指数均显著下降;燕窝中、高剂量组小鼠和阳性对照组小鼠胸腺指数和脾脏指数与正常组织无差异。
与模型对照组比较,燕窝中、高剂量组IL-2水平显著下降(P<0.05),与阳性对照组无明显差距,已接近正常水平。与模型对照组相比,燕窝中、高剂量组IFN-γ水平显著下降(P<0.05),与阳性对照组、正常对照组无显著差异,已接近正常水平。
6、讨论
采用二氧化硫熏蒸法将实验小鼠与玻璃熏箱中(SO2的浓度为0.5g/m3)熏蒸15min,1次/d,连熏14d,可以成功构建肺阴虚小鼠模型。用不同剂量的燕窝匀浆物对其进行干预后,通过肺部组织HE染色发现,中剂量浓度的燕窝匀浆物能够较好的维持肺阴虚小鼠肺组织形态间隙及支气管形态正常,仅有微量血细胞和一些空泡出现,说明其对肺阴虚小鼠的肺组织损伤有一定的恢复作用,且燕窝中剂量、高剂量的干预可达到较好的效果,尤其是中剂量燕窝的干预。
模型对照组小鼠的免疫器官指数较正常,对照组显著下降,而燕窝匀浆物中、高剂量组可显著恢复小鼠的免疫器官指数,说明燕窝对肺阴虚小鼠机体的免疫器官恢复具有促进作用,进一步证实燕窝具有提高机体免疫功能的作用。
血清中的细胞因子是由活化的免疫细胞分泌的,在相关的炎症反应中发挥免疫调节作用,其分泌量能够反映机体的免疫功能。作为免疫反应核心的T细胞,根据分泌细胞因子的不同分为Th0、Th1、Th2三种不同亚群[3]。Th0是Th1、Th2是两个亚群的前体[3]。Th1细胞分泌IL-2、TNF和IFN-γ等细胞因子;Th2分子分泌IL-4、IL-6、IL-10等细胞因子。IL-2称为T细胞生长因子,可促进其细胞分化、成熟与扩增,可作为Th1细胞亚群的代表因子[3]。IFN-γ能够激活巨噬细胞,通过杀伤病毒感染细胞,使病源遭到破坏。IL-4为B淋巴细胞的生长因子,具有促进B淋巴细胞增值分化等能力[4]。对肺阴虚小鼠血清细胞IL-2、IL-4和IFN-γ因子含量的测定结果中,各组小鼠血清中IL-4的含量差异也不具有统计学意义,推测这种细胞因子对肺阴虚小鼠机体的免疫反应不起主导作用,因而未发现显著变化;燕窝中、高剂量组IL-2、IFN-γ的含量接近于正常对照组,而显著低于模型对照组,说明模型对照组小鼠机体出现炎症反应,IL-2、IFN-γ水平升高,燕窝中、高剂量组小鼠血清的水平因燕窝匀浆物的干预得到了一定的控制,慢慢接近正常水平;推测细胞因子亚群在肺阴虚小鼠发病过程中细胞免疫调节中起主导作用[4]。从而说明,燕窝匀浆物在一定程度上能够调节肺阴虚小鼠细胞因子的分泌。从分子水平证明了燕窝匀浆物对肺阴虚小鼠的免疫调节作用。
04关于剂量、实验设计和服用频率
1、首先,关于实验动物的剂量的问题。动物对药物的耐受性比人大,由于实验小鼠或大鼠的体重和人体重相差很大,用体表面积剂量换算比较合适,即人的体表面积和人一天服用量的乘积等于实验小鼠的体表面积和小鼠一天服用量的乘积。70kg的人和20g的小鼠的体表面积比值为0.0026,人一天食用燕窝3~5g,小鼠一天的燕窝量为3*0.0026=0.0078g~5*0.0026=0.013g。文献中高剂量组小鼠的剂量相当于人一天食用9g燕窝,换算到小鼠即为9*0.0026/0.02=1.17g/kg约等于1.2g/kg,即文献里小鼠的灌胃量。
2、其次实验设计来说,以“燕窝对肺阴虚小鼠免疫功能影响”动物实验为例,造模用二氧化硫熏蒸,连续14天,构建肺阴虚模型,在造模成功燕窝治疗结束后,取血取脏器,做病理切片,测生化指标。从数据看,模型组的小鼠状态和人体肺阴虚状态十分接近,说明此种方法可以在小鼠身上模拟肺阴虚。而燕窝治疗组的小鼠肺组织形态间隙及支气管形态正常,说明燕窝对肺阴虚小鼠的肺部组织损伤有恢复作用,再加上燕窝治疗可以恢复小鼠的免疫器官指数,可以得出结论燕窝能提高肺阴虚小鼠的免疫。实验所用的动物模型是因为可以模拟人体才采用的,动物实验得出的结果是有理论基础且可靠的!
3、最后关于服用频率。在做动物实验时,给小鼠灌胃燕窝都是连续15天,不连续的灌胃对实验来说是没有意义的。在我们日常生活中,就算生病吃药,医生开药方都是连续吃药几天,偶尔吃一次药效果肯定不好。燕窝属于保健养生滋补品,养生是长期坚持的过程,没有吃一粒就能长命百岁的灵丹妙药,也没有偶尔吃吃就能强身健体一百年的燕窝。
参考文献
[1]李浩,侯辉,高雪等,肺阴虚证小鼠上下呼吸道病理变化观察[J].中医药信息,2000,06:46~47
[2]吴同玉.“肺应秋”调控机制的理论整理和免疫学实验研究[D].北京中医药大学,2005
[3]施弦,黄秋玲,郁峰,等.儿童难治性肺炎支原体肺炎血清炎性细胞因子的检测[J].中国医学科学学报,2013,(02):221~223
[4]孙立锋,鞠云飞,陈星,等.肺炎支原体肺炎急性期患儿血清Th1/Th2类细胞因子水平变化及临床意义[J].山东医药,2010(49):49~50
预告:第三届燕窝学术交流会
一、交流内容
1、燕窝团队解读燕窝最新研究进展和新产品。
2、多个专家分别介绍鱼胶、海参、鲍鱼、人参、陈皮、虫草、蜂产品。
3、介绍《燕窝专业知识培训手册》《走进鱼胶世界》内容和编写。
4、参观国家指定大连毛燕监管加工厂,以及即食燕窝、海参、鲍鱼工厂。
5、参观大连海岛海域海参、鲍鱼等海产养殖基地和现场捕捞。
6、燕窝、海参、鲍鱼、人参、陈皮、虫草、蜂产品以及其它滋补品展销。
二、地点时间
1、地点:辽宁省大连市
2、时间:2021年7月28~30日
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博士谈燕窝中山大学基础医学博士后————————广州中医药大学
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